國家食品藥品監(jiān)督管理局

關(guān)于印發(fā)化妝品中禁用物質(zhì)和限用物質(zhì)檢測方法驗證技術(shù)規(guī)范的通知

國食藥監(jiān)許[2010]455號


各省、自治區(qū)、直轄市食品藥品監(jiān)督管理局（藥品監(jiān)督管理局）：

　　為規(guī)范化妝品檢測方法的驗證程序，《化妝品中禁用物質(zhì)和限用物質(zhì)檢測方法驗證技術(shù)規(guī)范》已經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局化妝品標(biāo)準(zhǔn)專家委員會審議通過，現(xiàn)予印發(fā)。


　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　國家食品藥品監(jiān)督管理局
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 二○一○年十一月二十九日




化妝品中禁用物質(zhì)和限用物質(zhì)檢測方法
驗證技術(shù)規(guī)范

為加強對化妝品中禁用物質(zhì)和限用物質(zhì)檢測方法研究工作的技術(shù)指導(dǎo)，規(guī)范化妝品中禁用物質(zhì)和限用物質(zhì)檢測方法研究和驗證工作，明確檢測方法驗證內(nèi)容和評價標(biāo)準(zhǔn)，有效保證研究制定的檢測方法具備先進性和可行性，特制定本規(guī)范。
1 適用范圍
本規(guī)范規(guī)定了化妝品中禁用物質(zhì)和限用物質(zhì)檢測方法研究和建立過程中檢測方法驗證內(nèi)容、技術(shù)要求和評價指標(biāo)。
本規(guī)范適用于化妝品中禁用物質(zhì)和限用物質(zhì)檢測方法的驗證與評價。
2 依據(jù)
《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》
3 釋義
3.1 本規(guī)范中所指化妝品中禁用物質(zhì)是指《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》中規(guī)定的化妝品禁用組分。
3.2 本規(guī)范中所指化妝品中限用物質(zhì)是指《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》中規(guī)定的化妝品組分中限用物質(zhì)、限用防曬劑、限用防腐劑、限用著色劑、暫時允許使用的染發(fā)劑等。
4 定義與術(shù)語
4.1 被測物質(zhì)
是指本規(guī)范第3項規(guī)定的禁用物質(zhì)和限用物質(zhì)。
4.2特異性
在確定的分析條件下，檢測方法所具備的檢測和區(qū)分共存組分中被測物能力的特性。
4.3 線性及線性范圍
4.3.1 線性
是指在設(shè)計范圍內(nèi)檢測響應(yīng)值與樣品中被測物質(zhì)濃度或量成比例關(guān)系的程度。
4.3.2 線性范圍
是指利用一種方法取得精密度、準(zhǔn)確度均符合要求的檢測結(jié)果，而且呈線性的被測物質(zhì)濃度或量的變化范圍。
4.4檢出限和定量下限
4.4.1 檢出限：被測物質(zhì)能被檢測出的最低量。
4.4.2 定量下限：能夠?qū)Ρ粶y物質(zhì)準(zhǔn)確定量的最低濃度或質(zhì)量。
4.5 檢出濃度和最低定量濃度
4.5.1檢出濃度：按照檢測方法操作，方法檢出限對應(yīng)的被測物質(zhì)濃度。
4.5.2最低定量濃度：按照檢測方法操作，定量下限對應(yīng)的被測物質(zhì)濃度。
4.6 精密度
在確定的分析條件下，相同濃度被測物質(zhì)的一系列獨立測量結(jié)果的一致程度，包括日內(nèi)精密度和日間精密度。
日內(nèi)精密度：同一天測定的精密度。
日間精密度：不同天測定的精密度。
4.7回收率
提取回收率：是指在確定的分析條件下，回收到物質(zhì)的實際濃度的百分比，以樣品提取和處理過程前后被測物質(zhì)含量百分比表示。
方法回收率：是指在確定的分析條件下，被測物質(zhì)測得值與真實值的接近程度，以百分比表示。
4.8 實驗樣品
為建立和驗證檢測方法而使用的化妝品。
4.9 空白樣品
能夠以可重復(fù)方式獲得或制備的，不含被測物質(zhì)的化妝品。
4.10 穩(wěn)定性
在確定的分析條件下，一定時間內(nèi)被測物質(zhì)在一定溶劑或空白樣品中的化學(xué)穩(wěn)定性，包括日內(nèi)穩(wěn)定性和日間穩(wěn)定性。
日內(nèi)穩(wěn)定性：在一定溶劑或空白樣品中的被測物質(zhì)在正常實驗條件或適宜樣品保存的條件下放置一天的穩(wěn)定性。
日間穩(wěn)定性：在一定溶劑或空白樣品中的被測物質(zhì)在正常實驗條件或適宜樣品保存的條件下放置多天的穩(wěn)定性。
5 檢測方法驗證的內(nèi)容
方法驗證包括實驗室內(nèi)驗證和實驗室間驗證。
實驗室內(nèi)驗證的內(nèi)容一般包括：方法特異性、線性及線性范圍、檢出限和定量下限、檢出濃度和最低定量濃度、精密度、準(zhǔn)確度、回收率和實驗樣品檢測。
實驗室間驗證的內(nèi)容一般包括：方法特異性、線性及線性范圍、檢出限、最低定量濃度、日內(nèi)精密度、回收率和實驗樣品檢測。
6 檢測方法驗證的技術(shù)要求
6.1 實驗室內(nèi)方法驗證
6.1.1特異性
所采用的檢測方法需要克服任何可預(yù)見的干擾，特別是來自實驗樣品中除被測物質(zhì)以外的其他組分的干擾，一般對具有代表性的空白樣品和空白樣品加被測物質(zhì)的樣品，按照確定的樣品前處理方法處理后，進樣檢測分析，考察實驗樣品中除被測物質(zhì)以外的其他組分對被測物質(zhì)的測定有無干擾。
6.1.2 線性及線性范圍
線性考察：制備至少5個系列濃度（不包括零點）的被測物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液，進行檢測分析，記錄相應(yīng)的信號響應(yīng)值，以被測物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度為橫坐標(biāo)（x）、信號響應(yīng)值為縱坐標(biāo)（y）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，進行相關(guān)性分析，并回歸得到線性方程和相關(guān)系數(shù)（r）。呈線性的被測物質(zhì)的濃度或量的變化范圍確定為線性范圍。
方法線性考察：在空白樣品中加入被測物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，制備成至少5個系列濃度（不包括零點）的樣品溶液，進行檢測分析，記錄相應(yīng)的信號響應(yīng)值，以被測物質(zhì)的濃度為橫坐標(biāo)（x）、信號響應(yīng)值為縱坐標(biāo)（y）建立方法標(biāo)準(zhǔn)曲線，進行相關(guān)性分析，并回歸得到線性方程和相關(guān)系數(shù)（r）。呈線性的被測物質(zhì)濃度的變化范圍確定為線性范圍。
必要時，信號響應(yīng)值可進行數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進行回歸計算。
6.1.3 檢出限和定量下限
檢出限和定量下限考察見《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》。
6.1.4 檢出濃度和最低定量濃度
按照檢測方法操作，能夠從實驗樣品背景中區(qū)分出被測物質(zhì)響應(yīng)信號的最低濃度為檢出濃度，能夠?qū)�實驗樣品背景中被測物質(zhì)進行準(zhǔn)確定量的最低濃度或質(zhì)量為最低定量濃度。
6.1.5 精密度
6.1.5.1日內(nèi)精密度
通常至少采用高低兩種適宜濃度的被測物質(zhì)或在空白樣品中加入被測物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，其中：高濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)接近標(biāo)準(zhǔn)曲線或方法標(biāo)準(zhǔn)曲線的最高點（下同）；低濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)接近最低定量濃度（下同），于同一日內(nèi)測定至少6次，記錄被測物質(zhì)的信號響應(yīng)值，考察該組測量值的彼此符合程度，以相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）表示。
6.1.5.2日間精密度
通常至少采用高低兩種適宜濃度的被測物質(zhì)或在空白樣品中加入被測物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，于不同日測定，記錄被測物質(zhì)的信號響應(yīng)值，考察該組測量值的彼此符合程度，以相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）表示。
6.1.5.3相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）的計算
， 其中：
6.1.6 回收率
6.1.6.1提取回收率
采用在空白樣品或?qū)嶒灅悠分刑砑痈叩蛢煞N濃度被測物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品的方法測定，記錄被測物質(zhì)的信號響應(yīng)值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算被測物質(zhì)的濃度，計算提取回收率。
6.1.6.2方法回收率
采用在空白樣品或?qū)嶒灅悠分刑砑痈叩蛢煞N濃度被測物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品的方法測定，記錄被測物質(zhì)的信號響應(yīng)值，代入方法標(biāo)準(zhǔn)曲線計算被測物質(zhì)的濃度，計算方法回收率。
6.1.6.3回收率的計算公式
回收率= （樣品中被測物質(zhì)的測定量－樣品中被測物質(zhì)的原有量）/實際添加量×100%
6.1.7 穩(wěn)定性
6.1.7.1日內(nèi)穩(wěn)定性
通常至少采用高低兩種適宜濃度的被測物質(zhì)或在空白樣品中加入被測物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在正常實驗條件或適宜樣品保存的條件下，在不同時間點分別測定，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線或方法標(biāo)準(zhǔn)曲線計算被測物質(zhì)的濃度，并計算其準(zhǔn)確度和RSD值，考察被測物質(zhì)在溶液或空白樣品中放置一天內(nèi)的穩(wěn)定性。
6.1.7.2日間穩(wěn)定性
通常至少采用高低兩種適宜濃度的被測物質(zhì)或在空白樣品中加入被測物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在正常實驗條件或適宜樣品保存的條件下，連續(xù)多天測定，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線或方法標(biāo)準(zhǔn)曲線計算被測物質(zhì)的濃度，并計算其準(zhǔn)確度和RSD值，考察被測物質(zhì)在溶液或空白樣品中放置多天的穩(wěn)定性。
6.1.8 實驗樣品檢測分析
選擇具有代表性的實驗樣品，按照《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》規(guī)定取樣，嚴(yán)格按照檢測方法進行檢測分析。
6.1.9 禁用物質(zhì)陽性結(jié)果判定依據(jù)考察
化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果必須采用適宜的、可靠的方法進行確證。采用色譜-質(zhì)譜技術(shù)確證化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果時，按照確定的分析條件，考察實驗樣品與加入被測禁用物質(zhì)的空白樣品的質(zhì)量色譜峰保留時間以及濃度相當(dāng)時的定性離子的相對豐度比的一致性。采用其他技術(shù)確證化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果時，應(yīng)建立能夠保證確證結(jié)果正確性的依據(jù)和評價指標(biāo)。
6.2 實驗室間方法驗證
6.2.1 參加檢測方法驗證的機構(gòu)或?qū)嶒炇?br> 參加檢測方法驗證的機構(gòu)或?qū)嶒炇冶仨毷前凑諊�家有關(guān)認證認可的規(guī)定，取得資質(zhì)認定，其檢測人員、環(huán)境條件、設(shè)施設(shè)備等應(yīng)滿足檢測方法驗證的要求。每種檢測方法參加方法驗證的檢測機構(gòu)或?qū)嶒炇覒?yīng)不少于3家。
6.2.2 方法驗證樣品的提供
方法建立機構(gòu)或?qū)嶒炇覒?yīng)向參與方法驗證的機構(gòu)或?qū)嶒炇姨峁┮恢碌膶嶒灅悠�、空白樣品和�?biāo)準(zhǔn)品，并應(yīng)注意樣品的被測物質(zhì)的本底情況。
6.2.3 方法驗證技術(shù)要求
實驗室間的具體驗證技術(shù)要求同6.1實驗室內(nèi)方法驗證。
6.3方法驗證內(nèi)容的評價指標(biāo)
6.3.1特異性
實驗樣品中共存物質(zhì)應(yīng)對被測物質(zhì)的測定結(jié)果無干擾。
6.3.2 線性及線性范圍
線性范圍適宜，能夠滿足化妝品中被測物質(zhì)測定要求，且線性良好，線性相關(guān)系數(shù)≥0.99。
6.3.3 檢出限和定量下限
具有足夠低的檢出限和定量下限，能夠滿足化妝品中被測物質(zhì)測定要求。
6.3.4 檢出濃度和最低定量濃度
具有足夠低的檢出濃度和最低定量濃度，能夠滿足化妝品中被測物質(zhì)測定要求。通常要求方法最低定量濃度的精密度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)不超過20%，方法回收率要求在80%-120%之間。
6.3.5 精密度
根據(jù)化妝品中被測物質(zhì)的含量及確定的分析方法，精密度應(yīng)能夠滿足化妝品中被測物質(zhì)的測定要求，通常日內(nèi)和日間精密度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)不超過表1所列水平。特殊情況應(yīng)予以說明。
表1：精密度的接受范圍
被 測 物 精密度RSD
含量 ≤10 µg / kg 20%
10 µg / kg ＜ 含量 ≤ 100 µg / kg 15%
100 µg / kg ＜ 含量 ≤ 1000 µg / kg 10%
含量 ＞1000 µg / kg 5%
6.3.6 回收率
根據(jù)化妝品中被測物質(zhì)的含量及確定的分析方法，回收率應(yīng)能夠滿足化妝品中被測物質(zhì)的測定要求。通常提取回收率要求在85%-115%之間，如果提取回收率超出85%-115%的范圍，則要求方法回收率在85%-115%之間。特殊情況應(yīng)予以說明。
6.3.7 穩(wěn)定性
要求被測物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液或前處理后的樣品在穩(wěn)定時間內(nèi)使用和測定。
6.3.8 實驗樣品分析結(jié)果
在重復(fù)條件下兩次獨立測定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差在已確定分析方法的精密度接受范圍內(nèi)。
6.3.9 禁用物質(zhì)陽性結(jié)果判定依據(jù)
采用色譜-質(zhì)譜技術(shù)確證化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果時，實驗樣品與加入被測禁用物質(zhì)的空白樣品的質(zhì)量色譜峰保留時間要求一致，至少兩組濃度相當(dāng)時的定性離子的相對豐度比一致，定性離子的相對豐度比的最大偏差應(yīng)不超過表2的規(guī)定。采用其他技術(shù)確證化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果時，要求滿足陽性結(jié)果確證依據(jù)和評價指標(biāo)。

表2：禁用物質(zhì)陽性結(jié)果判定時相對離子豐度比的最大允許偏差

相對離子豐度比（k） k ≥50% 50 %> k ≥ 20 % 20 %> k ≥ 10 % k≤ 10 %
最大允許偏差 ±20% ±25% ±30% ±50%

6.3.10 實驗室間驗證結(jié)果的評價
實驗室間驗證結(jié)果應(yīng)相符。